Ox-LDL R-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402338-ACT

OLR1 kodiert den Rezeptor 1 für oxidiertes Low-Density-Lipoprotein (Ox-LDL R-1/LOX-1), einen Scavenger-Rezeptor, der oxidiertes LDL und andere modifizierte Liganden an der Zelloberfläche bindet und internalisiert. Die LOX-1-Signalübertragung beeinflusst die Aktivierung des Endothels, Reaktionen auf oxidativen Stress und entzündliche Transkriptionsprogramme und greift in NF-κB-abhängige Signalwege sowie in reaktive-Sauerstoffspezies(ROS)-gekoppelte Prozesse ein. Seine Expression ist durch proinflammatorische Stimuli und gestörte Strömungsverhältnisse induzierbar, was Rollen in der Gefäßbiologie, der Bildung von Makrophagen-Schaumzellen und dem Lipidstoffwechsel unterstützt. Eine dysregulierte OLR1-Aktivität und -Expression wurde mit Mechanismen der Atherosklerose sowie mit breiteren kardiometabolischen und entzündlichen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, wodurch es sich als nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Studien eignet.

Ox-LDL R-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen OLR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ox-LDL R-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des OLR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der OLR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ox-LDL R-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native OLR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ox-LDL R-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ox-LDL R-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem OLR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.