Plásmido CRISPR de Activación (h) Oviductin: sc-404814-ACT

OVGP1 codifica la oviductina, una proteína secretada, fuertemente glicosilada y de tipo mucina producida por el epitelio del oviducto, que contribuye a la composición y a las propiedades reológicas de los fluidos del aparato reproductor. La oviductina participa en las interacciones entre los gametos y el embrión temprano al modular la capacitación espermática, la unión a la zona pelúcida y el desarrollo preimplantacional mediante la organización de la matriz extracelular y procesos de adhesión dependientes de carbohidratos. Su expresión está regulada por la señalización hormonal y por programas de diferenciación epitelial que configuran el microambiente oviductal. La alteración de la expresión de OVGP1 se ha investigado como marcador de remodelación del epitelio del tracto reproductor y en estudios de estados patológicos ginecológicos en los que son relevantes la biología de las mucinas, la inflamación y los cambios en el fenotipo epitelial.

Oviductin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OVGP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Oviductin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OVGP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OVGP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Oviductin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OVGP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Oviductin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Oviductin en células tumorales con expresión de OVGP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.