Plasmide CRISPR/Cas9 KO OTUD2 (m): sc-432624

Présentation

Yod1 code OTUD2, une enzyme déubiquitinase de la famille OTU qui hydrolyse les chaînes d’ubiquitine afin de réguler la stabilité des protéines et l’amplitude des signaux. OTUD2 participe au contrôle, dépendant de l’ubiquitine, de la protéostase et des voies de signalisation sensibles au stress, notamment les circuits inflammatoires et de l’immunité innée où l’ubiquitination ajuste l’activation et l’arrêt des voies. En remodelant les signaux d’ubiquitine, OTUD2 peut influencer les décisions de survie cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les programmes transcriptionnels liés à l’homéostasie cellulaire. Une altération de l’« édition » de l’ubiquitine a été impliquée dans de nombreux aspects de la biologie des cancers et des mécanismes de maladies à médiation immunitaire, ce qui fait de Yod1/OTUD2 un nœud utile pour disséquer les voies dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OTUD2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Yod1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Yod1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Yod1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OTUD2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Yod1 pour l'étude de la signalisation de OTUD2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Yod1 essentiels à la fonction de OTUD2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Yod1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OTUD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le OTUD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Yod1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OTUD2 plasmide HDR (m) et le OTUD2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Yod1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Yod1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.