Plasmide CRISPR/Cas9 KO OTOP1 (m): sc-423421

Présentation

Otop1 code pour OTOP1, une protéine membranaire multipasse qui fonctionne comme un canal ionique sélectif aux protons et contribue à la détection et à la régulation du pH cellulaire. Chez la souris, l’activité d’OTOP1 est liée à la physiologie vestibulaire et à la biomineralisation des otoconies, des processus qui dépendent de microenvironnements ioniques finement contrôlés et du dépôt de carbonate de calcium. En modulant le flux de protons à travers les membranes, OTOP1 peut influencer l’homéostasie acido-basique et des événements de signalisation en aval sensibles au pH extracellulaire et intracellulaire. Une dérégulation de la gestion des protons dépendante d’OTOP1 a été associée à des troubles de l’équilibre et de la fonction de l’oreille interne, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la biologie sensorielle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OTOP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Otop1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Otop1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Otop1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OTOP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Otop1 pour l'étude de la signalisation de OTOP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Otop1 essentiels à la fonction de OTOP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Otop1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OTOP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le OTOP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Otop1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OTOP1 plasmide HDR (m) et le OTOP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Otop1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Otop1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.