Plásmido Doble Nickase (h) osteopontin/OPN/SPP1: sc-400219-NIC

SPP1 codifica la osteopontina (OPN), una fosfoglicoproteína secretada que también funciona como una citocina asociada a la matriz extracelular y regula la adhesión, la migración y la supervivencia celulares. La OPN señaliza a través de integrinas (por ejemplo, αvβ3) y de CD44 para modular la dinámica de las adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto y vías downstream que incluyen PI3K–AKT, MAPK/ERK y NF-κB. La expresan múltiples tipos celulares, como poblaciones inmunitarias y estromales, y contribuye a la señalización inflamatoria, la polarización de macrófagos y programas de remodelación tisular. La expresión desregulada de SPP1/OPN se estudia con frecuencia en la invasión y metástasis del cáncer, la fibrosis y las afecciones inflamatorias crónicas, donde actúa como un nodo mecanístico que conecta señales extracelulares con respuestas transcripcionales promigratorias y prosupervivencia.

osteopontin/OPN/SPP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SPP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SPP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SPP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SPP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.