Plásmido CRISPR de Activación (h) osteopontin/OPN/SPP1: sc-400219-ACT

SPP1 codifica la osteopontina (OPN), una fosfoglicoproteína secretada que actúa como citocina asociada a la matriz extracelular e influye en la adhesión, la migración y la supervivencia celulares mediante la interacción con integrinas y el receptor CD44. La OPN regula la señalización inflamatoria y la remodelación tisular al coordinar la quimiotaxis de leucocitos, la polarización de macrófagos y la actividad de los osteoclastos, e integra señales derivadas de las adhesiones focales y de la dinámica del citoesqueleto para modular las interacciones célula‑matriz. La expresión de SPP1 se altera con frecuencia en contextos de inflamación crónica, fibrosis, remodelado cardiovascular y comunicación cruzada entre el tumor y el microambiente inmunitario, donde puede modular la invasión, la angiogénesis y el reclutamiento de células inmunitarias. Estas propiedades hacen de SPP1 un nodo útil para estudiar la señalización extracelular, la regulación inmunitaria y fenotipos impulsados por la matriz en modelos celulares humanos.

osteopontin/OPN/SPP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SPP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

osteopontin/OPN/SPP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SPP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SPP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de osteopontin/OPN/SPP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SPP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de osteopontin/OPN/SPP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía osteopontin/OPN/SPP1 en células tumorales con expresión de SPP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.