Plasmide CRISPR d'Activation (h) OSCP: sc-404116-ACT

ATP5O code pour l’OSCP (oligomycin sensitivity-conferring protein), une sous-unité essentielle de l’ATP synthase mitochondriale F1Fo, qui stabilise le bras périphérique et couple la force proton-motrice à la production d’ATP au cours de la phosphorylation oxydative. En favorisant une génération d’ATP efficace liée à la chaîne de transport d’électrons, l’OSCP contribue à la bioénergétique cellulaire, au maintien du potentiel de membrane mitochondriale et à l’adaptation métabolique à la disponibilité en nutriments et en oxygène. Une perturbation de l’assemblage ou de la régulation de l’ATP synthase peut modifier l’équilibre rédox et favoriser la signalisation de stress mitochondriale, ce qui présente un intérêt pour la recherche sur la neurodégénérescence, les dysfonctionnements cardiométaboliques et la reprogrammation métabolique associée au cancer. En tant que protéine mitochondriale codée par le noyau, l’OSCP constitue également un outil utile pour étudier la coordination mito-nucléaire et les voies de protéostase qui influencent la respiration.

OSCP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATP5O sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OSCP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATP5O dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATP5O, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OSCP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATP5O natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OSCP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OSCP dans les cellules tumorales présentant une expression de ATP5O silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.