ORP150 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419398
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- ORP150 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im ORP150-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ORP150: sc-398224
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ORP150 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419398 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Hyou1 kodiert ORP150 (auch bekannt als hypoxieinduziertes Protein 1), ein im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisiertes Chaperon der HSP70-Familie, das die Proteinfaltung und Qualitätskontrolle unter Hypoxie, Glukosemangel und anderen zellulären Stressbedingungen unterstützt. ORP150 wirkt innerhalb von ER-Proteostase-Netzwerken und koordiniert sich mit Signalwegen der Unfolded-Protein-Response (UPR) wie PERK–eIF2α, IRE1–XBP1 und ATF6, um die Anhäufung fehlgefalteter Proteine zu begrenzen und die Integrität des sekretorischen Wegs aufrechtzuerhalten. In Mausmodellen und Zellsystemen wurde eine veränderte ORP150-Aktivität mit Stressanpassungsmechanismen in Verbindung gebracht, die Zellüberleben, Entzündung und metabolische Homöostase beeinflussen. Eine Fehlregulation der ER-Stressbewältigung und der Proteostase ist relevant für die Forschung zu ischämischen Schäden, Neurodegeneration und der Biologie des Tumormikromilieus, in denen Hypoxie und proteotoxischer Stress ausgeprägt sind.
Das ORP150 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hyou1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hyou1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hyou1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ORP150-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hyou1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ORP150-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Hyou1-Exone abzielen, die für die ORP150-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hyou1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom ORP150 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ORP150 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hyou1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ORP150 HDR-Plasmid (m) und ORP150 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hyou1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hyou1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.