Plásmido Doble Nickase (h) ORMDL3: sc-403587-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ORMDL3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ORMDL3 (h) y el plásmido de doble nickasa ORMDL3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ORMDL3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ORMDL3 | sc-403587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ORMDL3 | sc-403587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ORMDL3 (orosomucoide tipo 3) es una proteína de membrana del retículo endoplásmico que regula la biosíntesis de esfingolípidos al modular la actividad de la serina palmitoiltransferasa, influyendo así en la homeostasis de ceramidas y en la señalización mediada por lípidos. A través de su papel en el metabolismo lipídico del RE, ORMDL3 afecta las respuestas de estrés del RE, el manejo del calcio y las vías de señalización inflamatoria que determinan los estados de activación celular. La alteración de la expresión de ORMDL3 y los desequilibrios lipídicos asociados se han relacionado con desregulación inmunitaria y fenotipos de inflamación de las vías respiratorias, por lo que es un objetivo frecuente en estudios sobre la susceptibilidad al asma y rasgos inflamatorios relacionados. En modelos celulares humanos, perturbar ORMDL3 ofrece una vía para analizar cómo el flujo de esfingolípidos se entrecruza con programas impulsados por citocinas, la composición de membrana y vías adaptativas al estrés.
ORMDL3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ORMDL3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ORMDL3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ORMDL3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ORMDL3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.