Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Orexin R-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402343-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Orexin R-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Orexin R-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Orexin R-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HCRTR2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Orexin R-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402343-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Orexin R-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402343-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HCRTR2 kodiert den Orexinrezeptor 2 (Orexin R-2), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor für die Neuropeptide Orexin‑A und Orexin‑B, der Wachheit, Schlaf‑Wach‑Stabilität, Appetit und autonome Funktionen koordiniert. Nach Ligandenbindung aktiviert Orexin R‑2 Gq/Gi‑Signalwege, um die intrazelluläre Ca²⁺‑Dynamik, die PLC/PKC‑Aktivität und nachgeschaltete MAPK/ERK‑Signalwege zu modulieren, und verknüpft so neuronale Erregbarkeit mit einer umfassenderen neuroendokrinen Regulation. Die Rezeptoraktivität beeinflusst die synaptische Transmission und zirkadian gekoppelte Schaltkreise in Netzwerken des Hypothalamus und Hirnstamms. Genetische und funktionelle Störungen von HCRTR2 wurden mit Schlaf‑ und Vigilanz‑Phänotypen in Verbindung gebracht und werden im Kontext narcolepsiebezogener Mechanismen, der metabolischen Homöostase und der Biologie neuropsychiatrischer Merkmale untersucht.
Orexin R-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HCRTR2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HCRTR2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HCRTR2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HCRTR2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.