Orexin-A/B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420816

Descripción general

El gen Hcrt del ratón codifica los neuropéptidos orexina A y orexina B (hipocretinas), que son producidos por una población restringida de neuronas hipotalámicas y señalan principalmente a través de los GPCR OX1R y OX2R. La señalización de la orexina promueve el estado de alerta y el mantenimiento de la vigilia, integra el balance energético con la conducta alimentaria y modula las respuestas de recompensa y estrés mediante el acoplamiento a la movilización intracelular de Ca2+, la señalización MAPK y circuitos neuroendocrinos más amplios. Estos péptidos influyen en la salida autonómica y en las transiciones sueño–vigilia al moldear el impulso excitatorio a través de vías monoaminérgicas y colinérgicas. La disfunción de la orexina se asocia estrechamente con la inestabilidad sueño–vigilia y con fenotipos metabólicos, lo que convierte a Hcrt en un nodo clave para estudios mecanísticos del control de los estados neuronales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Orexin-A/B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hcrt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hcrt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hcrt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Orexin-A/B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hcrt para la investigación de la señalización de Orexin-A/B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hcrt críticos para la función de Orexin-A/B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hcrt para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Orexin-A/B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Orexin-A/B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hcrt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Orexin-A/B (m) y el plásmido HDR Orexin-A/B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hcrt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hcrt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.