Plásmido CRISPR de Activación (h) OR6K3: sc-415915-ACT

OR6K3 codifica un receptor olfativo de la familia de GPCR tipo rodopsina de clase A, un amplio grupo de receptores que acopla la detección de ligandos a la señalización de proteínas G heterotriméricas. Aunque son más conocidos por su papel en la detección de odorantes, los receptores olfativos también pueden expresarse en tejidos no olfativos, donde podrían influir en la dinámica de segundos mensajeros intracelulares, incluidas las vías dependientes de AMPc y de calcio. Las rutas impulsadas por GPCR se entrecruzan con programas transcripcionales que controlan el estado celular, la diferenciación y las respuestas al estrés, lo que convierte a OR6K3 en una diana útil para explorar redes de señalización mediadas por receptores. Se han descrito patrones de expresión alterados de receptores olfativos ectópicos en diversos contextos biológicos, lo que respalda la investigación de OR6K3 como marcador molecular y modulador de vías en modelos relevantes para enfermedad humana.

OR6K3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OR6K3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OR6K3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OR6K3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OR6K3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OR6K3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OR6K3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OR6K3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OR6K3 en células tumorales con expresión de OR6K3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.