Olfr666 Lentiviral Activation Particles (m): sc-435166-LAC

Olfr666 kodiert in der Maus einen olfaktorischen Rezeptor und gehört zur großen Superfamilie der G‑Protein‑gekoppelten Rezeptoren (GPCR), die Duftstoff‑Liganden erkennen und die sensorische Signaltransduktion einleiten. Nach Aktivierung koppeln olfaktorische Rezeptoren typischerweise an G‑Proteine, stimulieren die Adenylylcyclase, erhöhen den cAMP‑Spiegel und öffnen zyklonukleotidabhängige Ionenkanäle, wodurch chemische Reize in neuronale Aktivität umgesetzt werden. Obwohl sie klassischerweise mit olfaktorischen Sinnesneuronen assoziiert sind, wurde für einige olfaktorische Rezeptoren auch eine ektopische Expression in nicht‑olfaktorischen Geweben beschrieben, was Untersuchungen der GPCR‑Signalgebung jenseits des Geruchssinns motiviert. Eine Fehlregulation GPCR‑vermittelter Signalwege ist breit relevant für Neurobiologie und zelluläre Homöostase und liefert eine Begründung dafür, die Expression und Funktion von Olfr666 in sensorischen und signalgebungsbezogenen Modellen zu untersuchen.

Olfr666 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Olfr666-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Olfr666 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Olfr666-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Olfr666-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Olfr666-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.