Particules Lentivirales d'Activation (m) Olfr303: sc-434741-LAC

Olfr303 code un récepteur olfactif chez la souris appartenant à la famille des GPCR de classe A, de type rhodopsine, et serait capable de coupler la liaison d’un odorant à une signalisation via des protéines G hétérotrimériques. Après activation, les récepteurs olfactifs déclenchent généralement des cascades de transduction dépendantes de l’AMPc, qui régulent des canaux ioniques activés par les nucléotides cycliques et des réponses neuronales en aval dépendantes du calcium, façonnant ainsi le codage sensoriel et les réponses comportementales. Bien qu’Olfr303 soit principalement étudié dans le contexte de l’olfaction, l’expression ectopique de récepteurs olfactifs dans des tissus non olfactifs a été associée à des processus plus larges régulés par les GPCR, notamment la modulation des états de signalisation cellulaire et des réponses de type chimiotactique. Ces caractéristiques font d’Olfr303 une cible pertinente pour étudier la logique de signalisation des GPCR, la biologie des neurones sensoriels et les approches de « deorphanisation » des récepteurs.

Les particules d'activation lentivirales Olfr303 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Olfr303 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Olfr303 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Olfr303, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Olfr303. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Olfr303 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.