Plasmide Double Nickase (h) ODC: sc-401055-NIC

ODC1 humain code l’ornithine décarboxylase (ODC), l’enzyme limitante de la biosynthèse des polyamines, qui catalyse la décarboxylation de l’ornithine pour produire la putrescine, alimentant ensuite la production de spermidine et de spermine. En contrôlant les pools intracellulaires de polyamines, l’ODC influence la réplication de l’ADN, la dynamique de la chromatine, la traduction et la progression du cycle cellulaire, en s’intégrant aux voies de signalisation sensibles aux facteurs de croissance et aux programmes de stress métabolique. L’activité de l’ODC est étroitement régulée aux niveaux transcriptionnel, via la dégradation médiée par l’antizyme, et par des rétrocontrôles exercés par les métabolites des polyamines, faisant d’ODC1 un nœud clé de l’homéostasie cellulaire. Une dérégulation du métabolisme des polyamines et une expression altérée d’ODC1 ont été associées à des états prolifératifs et inflammatoires, et sont fréquemment étudiées en biologie du cancer et dans les travaux sur le remodelage métabolique.

ODC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ODC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ODC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ODC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ODC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.