Plásmido CRISPR de Activación (h) OAS2: sc-404302-ACT

La OAS2 humana (2′-5′-oligoadenilato sintetasa 2) es una enzima inducida por interferón que detecta ARN viral de doble cadena y cataliza la síntesis de oligoadenilatos enlazados 2′-5′, los cuales activan la RNasa L para promover la degradación de ARN viral y celular. Este eje OAS2–RNasa L es un componente central de la defensa antiviral innata y modula programas posteriores de inflamación y respuesta al estrés, al intersectar con la señalización del interferón de tipo I y con las vías de receptores de reconocimiento de patrones. La actividad alterada de OAS2 y las firmas de expresión asociadas se han relacionado con respuestas desreguladas al interferón implicadas en la susceptibilidad a virus, la inflamación crónica y fenotipos autoinmunes. En consecuencia, OAS2 se estudia con frecuencia en interacciones hospedador–patógeno, redes transcripcionales impulsadas por citocinas y la regulación de la señalización inmunitaria dependiente de la degradación de ARN.

OAS2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OAS2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OAS2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OAS2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OAS2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OAS2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OAS2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OAS2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OAS2 en células tumorales con expresión de OAS2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.