Plásmido CRISPR de Activación (m) Nur77: sc-420884-ACT

Nr4a1 codifica el receptor nuclear huérfano Nur77 (NR4A1), un factor de transcripción de respuesta inmediata que se induce rápidamente por estímulos diversos, entre ellos la señalización del receptor de antígeno, las citocinas y el estrés celular. Nur77 modula redes génicas que controlan la activación y la tolerancia de los linfocitos T, los programas inflamatorios de los macrófagos, la adaptación metabólica y la apoptosis, integrando señales de las vías MAPK, NF-κB y dependientes de calcio. En modelos murinos, la actividad alterada de Nr4a1 se ha vinculado con una homeostasis inmunitaria desregulada, inflamación crónica y fenotipos vasculares y metabólicos, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para explorar el control transcripcional sensible a estímulos. Sus funciones dependientes del contexto en decisiones sobre el destino celular también respaldan estudios mecanísticos en oncogénesis, respuestas al daño tisular y plasticidad transcripcional impulsada por el microambiente.

Nur77 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nr4a1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nur77 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nr4a1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nr4a1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nur77. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nr4a1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nur77 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nur77 en células tumorales con expresión de Nr4a1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.