Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nup88: sc-404091-ACT

NUP88 code pour Nup88, un composant central du complexe du pore nucléaire qui contribue au transport nucléocytoplasmique en organisant la face cytoplasmique du pore et en soutenant le trafic régulé des protéines et des ARN. Grâce à ses interactions avec d’autres nucléoporines et des récepteurs de transport, Nup88 aide à maintenir la perméabilité de l’enveloppe nucléaire et influence la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et la régulation de l’expression génique dépendante des signaux. Des altérations de l’expression ou de la localisation de NUP88 ont été associées à une perturbation de la dynamique de transport et à un contrôle anormal des programmes de prolifération et de différenciation. Ces caractéristiques font de NUP88 une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies de transport nucléaire et de leurs liens avec la régulation du génome dans les cellules humaines.

Nup88 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NUP88 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nup88 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NUP88 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NUP88, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nup88. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NUP88 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nup88 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nup88 dans les cellules tumorales présentant une expression de NUP88 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.