Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NTE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406850
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- NTE El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico NTE, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NTE Anticuerpo (G-4): sc-271049
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
NTE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406850 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PNPLA6 codifica la esterasa diana de neuropatía (NTE), una fosfolipasa/lisofosfolipasa asociada a membrana que hidroliza la fosfatidilcolina para regular la homeostasis de los fosfolípidos. La actividad de NTE contribuye a la integridad de la membrana del retículo endoplásmico, a la dinámica de las gotas lipídicas y al mantenimiento neuronal mediante el control de los niveles de lisofosfolípidos bioactivos. La alteración de PNPLA6 perturba la remodelación de membranas y las vías de señalización lipídica, procesos estrechamente vinculados a la estabilidad axonal y la función sináptica. La variación genética en PNPLA6 se asocia con fenotipos neurodegenerativos y del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un locus útil para estudiar mecanismos de vulnerabilidad neuronal impulsados por lípidos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO NTE (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PNPLA6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PNPLA6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PNPLA6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NTE.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PNPLA6 para la investigación de la señalización de NTE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PNPLA6 críticos para la función de NTE
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PNPLA6 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido NTE CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NTE CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PNPLA6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NTE (h) y el plásmido HDR NTE (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PNPLA6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PNPLA6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.