Nrf2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400017-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nrf2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nrf2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Nrf2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NFE2L2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nrf2: sc-518033
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nrf2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400017-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nrf2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400017-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFE2L2 kodiert den nukleären Faktor Erythroid 2–related factor 2 (Nrf2), einen basischen Leucin-Zipper-Transkriptionsfaktor, der die zelluläre Abwehr gegen oxidativen und elektrophilen Stress koordiniert. Nach Stabilisierung und Translokation in den Zellkern bindet Nrf2 an Antioxidans-Response-Elemente und induziert Gene, die an der Glutathionsynthese, der Xenobiotika-Detoxifikation, der NADPH-Regeneration und der Proteostase beteiligt sind, wodurch Redoxkontrolle mit Stoffwechsel- und Entzündungssignalen integriert wird. Dieser Signalweg überschneidet sich mit der KEAP1-abhängigen Ubiquitinierung, der MAPK-Signalübertragung und der Regulation der Autophagie und prägt dadurch Reaktionen auf mitochondriale Dysfunktion und Umwelttoxikantien. Eine dysregulierte Nrf2-Aktivität wurde in verschiedenen krankheitsrelevanten Kontexten mit veränderter Stresstoleranz und metabolischer Umprogrammierung in Verbindung gebracht, darunter Karzinogenese, Neurodegeneration und chronisch entzündliche Zustände.
Nrf2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NFE2L2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NFE2L2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NFE2L2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NFE2L2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.