Nrf2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421869-ACT

Das murine Gen **Nfe2l2** kodiert den Transkriptionsfaktor **Nrf2**, einen zentralen Regulator der zellulären Redox-Homöostase und der Xenobiotika-Abwehr. Unter oxidativem oder elektrophilem Stress akkumuliert Nrf2 und fördert die Transkription über Antioxidant-Response-Elemente (AREs), wodurch Gene induziert werden, die am Glutathionstoffwechsel, an der NADPH-Regeneration und an Phase-II-Detoxifikationsenzymen beteiligt sind. Dieser Signalweg ist mit der Proteostase, der mitochondrialen Funktion und inflammatorischen Signalwegen verknüpft und prägt zelluläre Antworten auf Umwelttoxikantien und metabolischen Stress. Eine fehlregulierte Nrf2-Aktivität wurde mit einer veränderten Anfälligkeit für oxidative Schädigung und Entzündung in Verbindung gebracht, weshalb **Nfe2l2** häufig als Knotenpunkt zur Modellierung von Stressanpassungsmechanismen in krankheitsrelevanten Systemen genutzt wird.

Nrf2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nfe2l2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nrf2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nfe2l2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nfe2l2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nrf2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nfe2l2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nrf2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nrf2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nfe2l2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.