Nrf2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400017-ACT

NFE2L2 kodiert den menschlichen Transkriptionsfaktor Nrf2, einen zentralen Regulator der zellulären Redoxhomöostase und der Detoxifikation elektrophiler Verbindungen. Unter oxidativem oder xenobiotischem Stress reichert sich Nrf2 an und bindet an Antioxidans-Response-Elemente, um Gene zu induzieren, die an der Glutathionsynthese, der NADPH-Regeneration, dem Hämstoffwechsel und der Proteostase beteiligt sind. Dabei integriert es Signalgebung über die KEAP1–CUL3-Ubiquitin-Achse sowie MAPK-/PI3K-assoziierte Signalwege. Dieses Programm prägt den Entzündungszustand und die metabolische Anpassung, und eine veränderte Nrf2-Aktivität wird mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch chronischen oxidativen Stress gekennzeichnet sind, darunter Neurodegeneration, kardiometabolische Dysfunktion und Tumorbiologie.

Nrf2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NFE2L2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nrf2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NFE2L2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NFE2L2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nrf2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NFE2L2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nrf2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nrf2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NFE2L2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.