Plásmido Doble Nickase (h) Nrf1: sc-401053-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Nrf1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Nrf1 (h) y el plásmido de doble nickasa Nrf1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NFE2L1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nrf1 Anticuerpo (G-5): sc-515360
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Nrf1 | sc-401053-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Nrf1 | sc-401053-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFE2L1 codifica el factor de transcripción Nrf1, un regulador CNC-bZIP anclado a la membrana que integra la proteostasis con la homeostasis redox celular. Ante el estrés del proteasoma, Nrf1 se somete a un procesamiento asociado al RE y se transloca al núcleo para inducir genes de subunidades del proteasoma y otros programas de desintoxicación mediante elementos de respuesta antioxidante, coordinando la capacidad del sistema ubiquitina–proteasoma, el metabolismo lipídico y la adaptación al estrés. La señalización de Nrf1 se intersecta con NRF2/KEAP1, la respuesta a proteínas desplegadas y vías metabólicas que modulan las respuestas inflamatorias y al daño oxidativo. La desregulación de la transcripción dependiente de Nrf1 se ha vinculado con una función alterada del proteasoma, desequilibrio metabólico y contribuciones dependientes del contexto a fenotipos oncogénicos y neurodegenerativos, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del control de calidad de proteínas.
Nrf1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NFE2L1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NFE2L1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NFE2L1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NFE2L1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.