Plasmide Double Nickase (h) NQO2: sc-402200-NIC

NQO2 (NRH:quinone oxydoréductase 2) code une flavoprotéine cytosolique qui catalyse la réduction à deux électrons des quinones et d’électrophiles apparentés, contribuant à l’homéostasie rédox cellulaire et au métabolisme des xénobiotiques. En modulant l’équilibre quinones/ROS (espèces réactives de l’oxygène), NQO2 intervient dans les réponses au stress oxydant, la fonction mitochondriale et les voies de détoxification qui influencent la signalisation des dommages à l’ADN et la survie cellulaire. Des altérations de l’activité de NQO2 ont été étudiées dans le contexte de la carcinogenèse, de la neurodégénérescence et de phénotypes inflammatoires, où le déséquilibre rédox et la charge en électrophiles sont marqués. NQO2 humain est également décrit comme un nœud d’interaction pour de petites molécules et des métabolites endogènes, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des voies de signalisation liées au rédox.

NQO2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NQO2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NQO2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NQO2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NQO2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.