NPY Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401098-ACT

O NPY humano codifica o neuropeptídeo Y, um neurotransmissor peptídico secretado que sinaliza principalmente por meio de receptores acoplados à proteína G da família Y para regular a excitabilidade neuronal, a transmissão sináptica e os outputs neuroendócrinos. O NPY é um modulador-chave da homeostase energética, do comportamento alimentar, das respostas circadianas e ao estresse, e do controle autonômico, com efeitos a jusante sobre o cAMP e a sinalização dependente de cálcio em tecidos neurais e periféricos. Além das funções no sistema nervoso central, o NPY influencia o tônus vascular e a atividade de células imunes, conectando vias neuroimunes e cardiometabólicas. A desregulação da sinalização de NPY tem sido associada a fenótipos neuropsiquiátricos, características relacionadas à obesidade e à biologia do risco cardiovascular, tornando-o um marcador amplamente utilizado e um nó funcional para estudos mecanísticos.

NPY O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NPY sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NPY O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NPY em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NPY, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NPY. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NPY nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NPY no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NPY em células tumorais com expressão de NPY silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.