Plasmide CRISPR/Cas9 KO Notum (h): sc-409374

Présentation

NOTUM code pour Notum, une carboxylestérase sécrétée qui régule négativement la signalisation Wnt en désacylant la modification palmitoléate portée par les ligands Wnt, limitant ainsi l’engagement ligand–récepteur et la transcription en aval dépendante de la β-caténine. En modulant la formation des gradients Wnt et la durée du signal, Notum contribue à l’organisation du développement, à l’homéostasie tissulaire et à la régulation des niches de cellules souches. Une activité altérée de NOTUM a été associée à un dérèglement de l’activité de la voie Wnt observé dans de multiples contextes pathologiques, notamment en cancérologie et dans des troubles impliquant un renouvellement et une différenciation épithéliaux aberrants. En tant qu’antagoniste soluble de Wnt, Notum est également pertinente pour l’étude des signalisations proches de la matrice extracellulaire et du contrôle paracrine de l’activation de la voie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Notum (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NOTUM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NOTUM, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NOTUM à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Notum.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NOTUM pour l'étude de la signalisation de Notum, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NOTUM essentiels à la fonction de Notum
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NOTUM pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Notum plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Notum plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NOTUM. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Notum plasmide HDR (h) et le Notum (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NOTUM pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NOTUM définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.