Notch1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421930-LAC

Notch1 kodiert einen Single-Pass-Transmembranrezeptor, der die kanonische Notch-Signalübertragung über eine ligandenabhängige proteolytische Prozessierung und die Freisetzung der intrazellulären Notch-Domäne vermittelt. Diese transloziert in den Zellkern und reguliert dort die CSL/RBPJ-gesteuerte Transkription. In Mausmodellen ist Notch1 ein zentraler Determinant für Zellschicksalsentscheidungen, die Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen sowie die kontextabhängige Kontrolle von Proliferation und Apoptose in hämatopoetischen, vaskulären, neuralen und epithelialen Zelllinien. Die Notch1-Aktivität ist mit Signalwegen wie Wnt/β-Catenin, NF-κB, PI3K–AKT, MAPK und TGF-β vernetzt, um Differenzierungsprogramme und die Gewebehomöostase zu koordinieren. Eine fehlregulierte Notch1-Signalgebung wird intensiv im Zusammenhang mit Entwicklungsdefekten, der Differenzierung und Transformation von Immunzellen, vaskulärem Remodeling sowie neuroentwicklungs- und epithelbezogenen Pathophysiologien untersucht.

Notch1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Notch1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Notch1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Notch1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Notch1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Notch1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.