Notch1 Double Nickase Plasmid (m): sc-421930-NIC

Mouse Notch1 kodiert einen Einzelpass-Transmembranrezeptor, der die kanonische Notch-Signalübertragung vermittelt und so Zellschicksalsentscheidungen, die Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen sowie Differenzierungsprogramme während der Entwicklung und der Gewebehomöostase steuert. Die Bindung eines Liganden löst eine proteolytische Prozessierung und die Freisetzung der intrazellulären Notch-Domäne aus, die in den Zellkern transloziert und dort gemeinsam mit RBPJ/CSL und Koaktivatoren wie MAML Transkriptionsnetzwerke reguliert, darunter Zielgene der HES- und HEY-Familie. Notch1 ist mit Signalwegen verknüpft, die Proliferation, Apoptose und Linienfestlegung steuern, und seine Fehlregulation ist mit veränderter Entwicklung von Immunzellen sowie tumorigenen Prozessen in mehreren Geweben assoziiert. In Mausmodellen wird die gezielte Beeinflussung von Notch1 breit eingesetzt, um Entwicklungsphänotypen, hämatopoetische Regulation und mikroenvironmentale Signale zu untersuchen, die die Gewebeorganisation prägen.

Notch1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Notch1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Notch1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Notch1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Notch1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.