Notch 2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401323-LAC

Das humane Gen **NOTCH2** kodiert **Notch 2**, einen einzelpassigen transmembranen Rezeptor, der juxtakrine Signalübertragung vermittelt und so Entscheidungen über Zellschicksal, Proliferation und Differenzierung steuert. Nach Ligandenbindung durch Delta-like- oder Jagged-Proteine wird Notch 2 proteolytisch verarbeitet, wodurch die intrazelluläre Notch-Domäne freigesetzt wird; diese transloziert in den Zellkern und kooperiert dort mit RBPJ/CSL sowie Koaktivatoren, um Transkriptionsprogramme wie **HES** und **HEY** zu regulieren. Die NOTCH2-Aktivität integriert sich in Entwicklungswege und beeinflusst die Gewebehomöostase, unter anderem im Immun- und Epithelkontext. Eine fehlregulierte NOTCH2-Signalgebung ist an angeborenen Erkrankungen und der Krebsbiologie beteiligt, wobei eine veränderte Signalwegaktivität Differenzierungszustände und Lineage-Festlegung beeinflusst.

Notch 2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NOTCH2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Notch 2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NOTCH2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Notch 2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NOTCH2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.