Notch 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401323-ACT

NOTCH2 kodiert Notch 2, einen Transmembranrezeptor mit einer einzigen Transmembrandomäne, der juxtakrines Signaling vermittelt und dadurch Zellschicksalsentscheidungen, Linienfestlegung und Gewebehomöostase steuert. Nach Ligandenbindung (z. B. JAGGED/Delta-like) setzt proteolytische Prozessierung die intrazelluläre Notch-Domäne frei, die zusammen mit CSL/RBPJ und Koaktivatoren die Transkription reguliert und dabei mit Signalwegen wie Wnt, TGF-β und NF-κB integriert. Die Aktivität von Notch 2 beeinflusst das Gleichgewicht zwischen Proliferation und Differenzierung, die Aufrechterhaltung von Stamm-/Vorläuferzellen sowie die Entwicklung von Immunzellen, mit kontextabhängigen Effekten in unterschiedlichen Organsystemen. Eine Fehlregulation der NOTCH2-Signalgebung ist mit Entwicklungsstörungen assoziiert und wurde an onkogenen und entzündlichen Prozessen beteiligt, was ihre Untersuchung in Differenzierung, mikroenvironmentaler Signalübertragung und Krankheitsmodellierung unterstützt.

Notch 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NOTCH2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Notch 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NOTCH2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NOTCH2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Notch 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NOTCH2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Notch 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Notch 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NOTCH2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.