Nolz-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405058-ACT

Das humane ZNF503 kodiert den Zinkfinger-Transkriptionsfaktor Nolz-1, einen nukleären Regulator, der Genexpressionsprogramme formt, welche die Festlegung des Zellschicksals, die Differenzierung und die Gewebemusterbildung steuern. Die Aktivität von Nolz-1 wird häufig im Kontext von Netzwerken der Transkriptionsrepression/-aktivierung sowie des Crosstalks entwicklungsbiologischer Signalwege untersucht, die die Linienfestlegung und die Morphogenese beeinflussen. Eine fehlregulierte Expression von ZNF503 wurde in mehreren krankheitsbezogenen Forschungskontexten – darunter die Krebsbiologie und neuroentwicklungsbiologische Modelle – mit veränderten Differenzierungszuständen und proliferativen Phänotypen in Verbindung gebracht. Als DNA-bindender Regulator stellt Nolz-1 einen gut untersuchbaren Knotenpunkt dar, um vorgelagerte regulatorische Einflüsse und nachgelagerte Transkriptionsziele zu analysieren, die die zelluläre Identität kontrollieren.

Nolz-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF503-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nolz-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF503-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF503-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nolz-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF503-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nolz-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nolz-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF503-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.