Nociceptin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421945

Descripción general

Pnoc codifica la nociceptina/orfanina FQ, un neuropéptido endógeno ligando del receptor tipo opioide 1 (OPRL1/NOP) que modula la excitabilidad neuronal y la transmisión sináptica. La señalización de la nociceptina activa vías acopladas a Gi/o que reducen la actividad de la adenilil ciclasa, regulan las salidas de cAMP/PKA e influyen en la conductancia de canales iónicos y en la liberación de neurotransmisores. En el sistema nervioso central y en tejidos periféricos, este eje contribuye a la regulación de la nocicepción, la respuesta al estrés, los circuitos de recompensa y la función neuroendocrina. La desregulación de la señalización PNOC–NOP se ha implicado en fenotipos relevantes para el procesamiento del dolor, conductas tipo ansiedad y depresión, neuroadaptaciones relacionadas con el consumo de sustancias y la modulación de la inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nociceptin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pnoc en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pnoc junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pnoc tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nociceptin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pnoc para la investigación de la señalización de Nociceptin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pnoc críticos para la función de Nociceptin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pnoc para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nociceptin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Nociceptin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pnoc. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nociceptin (m) y el plásmido HDR Nociceptin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pnoc para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pnoc definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.