Plasmide CRISPR d'Activation (h) NKp44: sc-407295-ACT

Le gène humain **NCR2** code **NKp44**, un récepteur activateur des cellules tueuses naturelles (NK) exprimé à la surface des cellules NK activées et de certaines cellules lymphoïdes innées, contribuant à l’intégration des signaux de surveillance immunitaire à la membrane cellulaire. NKp44 reconnaît divers ligands présents sur des cellules stressées, infectées ou transformées et transmet un signal d’activation via des voies dépendantes d’adaptateurs, favorisant la libération de granules cytotoxiques et la production de cytokines. Ce récepteur intervient dans des voies impliquées dans la reconnaissance immunitaire innée, la signalisation des immunorécepteurs basée sur les motifs tyrosine, ainsi que la régulation des réponses inflammatoires. Une dérégulation de l’activité et des profils d’expression de NCR2/NKp44 a été associée à une altération de la fonction des cellules NK dans des contextes tels que les infections virales, l’immunologie tumorale et les mécanismes des maladies inflammatoires chroniques.

NKp44 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NCR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NKp44 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NCR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NCR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NKp44. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NCR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NKp44 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NKp44 dans les cellules tumorales présentant une expression de NCR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.