NIS CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402298-ACT

SLC5A5 kodiert den Natrium/Iodid-Symporter (NIS), einen Transporter der Plasmamembran, der die Iodidaufnahme an den elektrochemischen Natriumgradienten koppelt, um Iodid in Zellen anzureichern. Die NIS-Aktivität unterstützt iodidabhängige biosynthetische Prozesse und beeinflusst das zelluläre Redoxgleichgewicht; ihre Regulation ist mit dem Differenzierungszustand sowie mit transkriptionellen Kontrollprogrammen verknüpft, die die Expression von Membrantransportern steuern. Eine veränderte SLC5A5-Expression und Fehlverortung wurden in Schilddrüsen- und Nicht-Schilddrüsen-Kontexten beschrieben; dabei kann eine gestörte Iodidhandhabung als funktioneller Indikator für Linienidentität und Transporter-Trafficking dienen. Diese Eigenschaften machen NIS zu einem nützlichen Modell für die Untersuchung der Biologie von Solute-Carriern, der Reifung von Membranproteinen und transkriptioneller Mechanismen, die die epitheliale Spezialisierung kontrollieren.

NIS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC5A5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NIS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC5A5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC5A5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NIS-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC5A5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NIS-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NIS-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC5A5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.