NIRF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403908

Übersicht

UHRF2 kodiert NIRF, eine RING-Finger-E3-Ubiquitinligase und einen epigenetischen Regulator, der an der Kopplung von Ubiquitin-Signalen an chromatinbasierte Mechanismen der Genexpressionskontrolle beteiligt ist. NIRF enthält Domänen, die die Erkennung modifizierter Histone und von DNA-Methylierungszuständen ermöglichen, wodurch es mit der Aufrechterhaltung epigenetischer Information während der DNA-Replikation sowie mit der Regulation des Zellzyklus verknüpft ist. Über ubiquitinvermittelte Proteostase und Chromatin-Remodelling kann UHRF2 DNA-Schadensantworten und Transkriptionsprogramme beeinflussen, die Proliferation und Differenzierung steuern. Eine Fehlregulation der Expression oder Aktivität von UHRF2/NIRF wurde mit veränderten epigenetischen Landschaften in mehreren Kontexten von Krebs- und Neurobiologie in Verbindung gebracht, was es für Studien zur Genomstabilität und onkogenem Signaling relevant macht.

Das NIRF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UHRF2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UHRF2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UHRF2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NIRF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UHRF2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NIRF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UHRF2-Exone abzielen, die für die NIRF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UHRF2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NIRF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NIRF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UHRF2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NIRF HDR-Plasmid (h) und NIRF HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UHRF2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UHRF2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.