Partículas Lentivirales de Activación (h) NIPBL: sc-403371-LAC

NIPBL (proteína similar a Nipped-B) codifica un factor de carga de cohesina que coordina la cohesión de las cromátidas hermanas y la organización de la cromatina de orden superior, lo que permite una segregación cromosómica precisa y respuestas al daño del ADN. Al facilitar el depósito de cohesina y estabilizar contactos de largo alcance entre potenciadores y promotores, NIPBL influye en programas transcripcionales a escala genómica fundamentales para el desarrollo embrionario y las decisiones de destino celular. La regulación dependiente de NIPBL se interseca con vías que controlan el momento de replicación, la elongación transcripcional y la reparación de roturas de doble cadena. La desregulación de la función de NIPBL se asocia con cohesinopatías como el síndrome de Cornelia de Lange y se ha estudiado en el contexto de cambios en la arquitectura de la cromatina observados en cáncer y trastornos del neurodesarrollo.

Las partículas de activación lentiviral NIPBL (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NIPBL en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NIPBL (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NIPBL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NIPBL. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NIPBL y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.