Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404001-NIC

CHRND codifica a subunidade delta do receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR) do tipo muscular, um canal catiônico pentamérico ativado por ligante, concentrado na membrana pós-sináptica da junção neuromuscular. Após a ligação da acetilcolina, o receptor se abre para permitir o fluxo de Na⁺ e K⁺, promovendo a despolarização da placa motora e acoplando a transmissão sináptica à contração do músculo esquelético. A função de CHRND integra-se a vias que governam a montagem e a maturação da sinapse, incluindo a sinalização agrina–LRP4–MuSK, o agrupamento de receptores e a estabilização por rapsina (rapsyn) e arcabouços associados. Alterações genéticas nas subunidades do nAChR muscular, incluindo CHRND, estão associadas a distúrbios da transmissão neuromuscular, como síndromes miastênicas congênitas, tornando este gene relevante para estudos mecanísticos de excitabilidade sináptica e biogênese de receptores.

Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CHRND em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CHRND. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CHRND. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CHRND interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.