Plásmido CRISPR de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2: sc-401641-ACT

CHRNB2 codifica la subunidad β2 de los receptores nicotínicos neuronales de acetilcolina (nAChR), canales catiónicos activados por ligando que se ensamblan con subunidades α para regular la excitabilidad de la membrana y la señalización dependiente de calcio. Los nAChR que contienen β2 acoplan la neurotransmisión colinérgica a vías posteriores que influyen en la plasticidad sináptica, la liberación de neurotransmisores y la modulación de circuitos en el sistema nervioso central. La alteración de la expresión de CHRNB2 o de la composición del receptor se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, incluida la dependencia a la nicotina y la susceptibilidad a crisis epilépticas, lo que refleja su papel en el equilibrio excitatorio/inhibitorio. Como subunidad de un receptor de membrana, CHRNB2 también es relevante para estudios sobre el ensamblaje del receptor, su tráfico y su sensibilidad farmacológica dentro de las redes de señalización colinérgica.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRNB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRNB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRNB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRNB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 en células tumorales con expresión de CHRNB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.