Plasmide Double Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2: sc-403376-NIC

CHRNA2 code la sous-unité α2 des récepteurs nicotiniques neuronaux de l’acétylcholine (nAChR), des canaux cationiques activés par un ligand qui s’assemblent en hétéropentamères pour assurer une neurotransmission cholinergique rapide. Lors de la liaison de l’acétylcholine ou d’un agoniste nicotinique, les nAChR contenant α2 augmentent l’entrée de Na⁺ et de Ca²⁺, modulant l’excitabilité membranaire et une signalisation dépendante de l’activité qui recoupe des programmes transcriptionnels régulés par le Ca²⁺ ainsi que la plasticité synaptique. L’expression de CHRNA2 contribue à la modulation des circuits dans le système nerveux central, en influençant des processus tels que l’éveil, l’attention et la signalisation liée à la récompense. Les variations génétiques et une fonction nAChR dérégulée ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et à des traits liés à l’usage de substances, faisant de CHRNA2 une cible utile pour des études mécanistiques des perturbations des voies cholinergiques.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRNA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRNA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRNA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRNA2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.