Plásmido Doble Nickase (h) NGAL: sc-401838-NIC

LCN2 codifica la lipocalina asociada a la gelatinasa de neutrófilos (NGAL), una lipocalina secretada que se une al hierro asociado a sideróforos y modula el tráfico de hierro, la defensa antimicrobiana y las respuestas de estrés epitelial. NGAL participa en la señalización de la inmunidad innata y en la remodelación inflamatoria, conectándose con vías que controlan la quimiotaxis, las redes de citocinas y la dinámica de la matriz extracelular mediante interacciones con socios como MMP9. En tejidos humanos, la alteración de la expresión de LCN2/NGAL se asocia con frecuencia con inflamación metabólica, respuestas a lesión renal y cardiovascular, y la comunicación tumor–estroma, lo que la convierte en un indicador útil de programas adaptativos al estrés. Estas características respaldan estudios mecanísticos del estrés oxidativo dependiente del hierro, el crosstalk epitelio–inmune y la regulación del microambiente.

NGAL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LCN2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LCN2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LCN2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LCN2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.