Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
NFATc1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400164
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- NFATc1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico NFATc1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NFATc1 Anticuerpo (7A6): sc-7294
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
NFATc1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400164 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
NFATC1 codifica NFATc1, un factor de transcripción regulado por calcio/calcineurina que se transloca al núcleo tras la señalización del receptor de células T para coordinar programas de activación inmunitaria. NFATc1 integra la señalización dependiente de Ca2+ con entradas de MAPK y AP-1 para controlar la transcripción de citocinas, moléculas coestimuladoras y genes asociados a la diferenciación en linfocitos. Más allá de la inmunidad, NFATc1 contribuye a la osteoclastogénesis y a decisiones de destino celular mediante el diálogo cruzado con RANKL, NF-κB y otras redes transcripcionales. La actividad desregulada de NFATc1 se ha asociado con patobiología inflamatoria y con estados transcripcionales aberrantes observados en múltiples contextos relacionados con el cáncer, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos del acoplamiento entre señalización y transcripción.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO NFATc1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NFATC1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NFATC1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NFATC1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NFATc1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NFATC1 para la investigación de la señalización de NFATc1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de NFATC1 críticos para la función de NFATc1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NFATC1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido NFATc1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NFATc1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NFATC1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NFATc1 (h) y el plásmido HDR NFATc1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NFATC1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NFATC1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.