Plasmide CRISPR/Cas9 KO NFAT5 (h): sc-401359

Présentation

NFAT5 (nuclear factor of activated T cells 5), également connu sous le nom de TonEBP, est un facteur de transcription de la famille Rel qui coordonne l’adaptation cellulaire au stress hypertonique en régulant des programmes géniques osmo‑protecteurs, notamment des transporteurs et des enzymes impliqués dans l’accumulation d’osmolytes compatibles. Dans les contextes immunitaires et épithéliaux, NFAT5 influence la production de cytokines, la polarisation des macrophages et la fonction des lymphocytes, reliant la détection des variations osmotiques à la signalisation inflammatoire et aux voies de survie cellulaire. L’activité de NFAT5 s’articule avec les réseaux de signalisation des MAPK et ceux dépendants du calcium, et contribue au maintien de l’homéostasie protéique ainsi qu’au contrôle du volume cellulaire en situation de stress. Une signalisation NFAT5 dérégulée a été associée à des troubles inflammatoires, à la physiologie de la médullaire rénale et aux réponses au stress du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’adaptation au stress et de la régulation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NFAT5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NFAT5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NFAT5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NFAT5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NFAT5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NFAT5 pour l'étude de la signalisation de NFAT5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NFAT5 essentiels à la fonction de NFAT5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NFAT5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NFAT5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NFAT5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NFAT5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NFAT5 plasmide HDR (h) et le NFAT5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NFAT5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NFAT5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.