Plasmide CRISPR d'Activation (h) NFAT5: sc-401359-ACT

NFAT5 (nuclear factor of activated T cells 5), également appelé tonicity-responsive enhancer binding protein, est un facteur de transcription de la famille Rel qui coordonne des programmes géniques d’osmo-adaptation dans les cellules humaines. Il régule l’expression de transporteurs, de chaperons et d’enzymes métaboliques qui maintiennent l’équilibre ionique et la protéostasie en situation de stress hypertonique, en intégrant des signaux issus des voies p38/MAPK, JNK et de voies dépendantes du calcium. L’activité de NFAT5 influence la survie, la prolifération et la différenciation cellulaires dans des contextes immunitaires, médullaires rénaux et épithéliaux, et sa dérégulation a été associée à la signalisation inflammatoire, aux réponses tissulaires au stress et à l’adaptation des cellules tumorales à des microenvironnements défavorables. En tant que médiateur central de la transcription sensible à la tonicité et au stress, NFAT5 est largement étudié pour ses rôles dans la régulation des cytokines, la fonction de barrière et les mécanismes de résilience cellulaire.

NFAT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NFAT5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NFAT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NFAT5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NFAT5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NFAT5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NFAT5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NFAT5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NFAT5 dans les cellules tumorales présentant une expression de NFAT5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.