Plasmide Double Nickase (h) NFκB p50: sc-400087-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NFκB p50 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NFκB p50 Double Nickase (h) et le plasmide NFκB p50 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NFKB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NFκB p50 Antibody (E-10): sc-8414
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NFκB p50 | sc-400087-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NFκB p50 | sc-400087-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFKB1 code pour la sous-unité p50 de NFκB, un composant central des complexes de facteurs de transcription NF-κB qui régulent l’expression génique inductible en réponse aux cytokines inflammatoires, à la signalisation des récepteurs de type Toll (TLR), à l’engagement des récepteurs antigéniques et au stress cellulaire. La p50 de NFκB est générée par le traitement protéolytique du précurseur p105 et forme des homo- ou hétérodimères (le plus souvent avec RelA/p65) qui contrôlent des programmes transcriptionnels régissant l’immunité innée et adaptative, la survie cellulaire et la différenciation. Via les voies NF-κB canonique et non canonique, p50 influence l’accessibilité de la chromatine et les réseaux de cytokines/chimiokines, modulant les réponses à l’infection et aux lésions tissulaires. Une activité dérégulée de NFKB1 et des interactions entre voies avec les signalisations MAPK, JAK/STAT et interféron sont fréquemment impliquées dans l’inflammation chronique, le dysfonctionnement immunitaire et des microenvironnements oncogènes.
NFκB p50 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NFKB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NFKB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NFKB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NFKB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.