Plásmido CRISPR de Activación (h) NFκB p50: sc-400087-ACT

NFKB1 codifica la subunidad p50 de NFκB, un componente central de unión al ADN de la familia de factores de transcripción NF-κB que regula programas inducibles de expresión génica en la inmunidad y las respuestas al estrés. p50 forma habitualmente heterodímeros con RELA (p65) u homodímeros que modulan las salidas transcripcionales que controlan citocinas, quimiocinas, moléculas de adhesión y factores antiapoptóticos. La actividad de NFκB p50 se integra aguas abajo de la señalización del receptor de TNF, de IL-1/TLR, del receptor de antígeno y del daño en el ADN mediante el procesamiento dependiente de IKK de p105 a p50 y la translocación al núcleo. La desregulación de la señalización de NFκB1 está implicada en la inflamación crónica, la desregulación inmunitaria, programas transcripcionales oncogénicos y respuestas alteradas a la infección y al estrés celular, lo que la convierte en un objetivo frecuente en estudios de vías y redes génicas.

NFκB p50 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NFKB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NFκB p50 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NFKB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NFKB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NFκB p50. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NFKB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NFκB p50 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NFκB p50 en células tumorales con expresión de NFKB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.