Plásmido Doble Nickase (h) Neurofibromin: sc-400625-NIC

NF1 codifica la neurofibromina, un gran supresor tumoral citoplasmático que funciona principalmente como una proteína activadora de la GTPasa de Ras (Ras-GAP), convirtiendo Ras-GTP activo en Ras-GDP para frenar la señalización aguas abajo de MAPK/ERK y PI3K-AKT. Mediante esta regulación negativa, la neurofibromina influye en la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la supervivencia, y contribuye al control homeostático de la señalización por factores de crecimiento. Las alteraciones con pérdida de función en NF1 interrumpen la regulación de la vía de Ras y se asocian fuertemente con la neurofibromatosis tipo 1 y con procesos oncogénicos impulsados por Ras en múltiples contextos tisulares. Por ello, la perturbación de NF1 se utiliza ampliamente para estudiar la transducción de señales, la plasticidad celular y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos relevantes para la enfermedad.

Neurofibromin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NF1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.