Neuro D CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400375-ACT

NEUROD1 kodiert Neuro D, einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor, der die Festlegung des Zellschicksals sowie die terminale Differenzierung in neurogenen und endokrinen Zelllinien steuert. Neuro D reguliert Gennetzwerke, die an der neuronalen Reifung, der synaptischen Funktion und der Entwicklung der pankreatischen Langerhans-Inseln beteiligt sind, und koordiniert dabei transkriptionelle Programme nachgeschaltet zu entwicklungsbiologischen Signalwegen. In humanen Zellen wurden veränderte NEUROD1-Expression oder eine gestörte regulatorische Kontrolle mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und fehlregulierter endokriner Differenzierung in Verbindung gebracht, was NEUROD1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Lineage-Commitment und transkriptionellen Schaltkreisen macht. Die experimentelle Modulation von NEUROD1 bietet einen gut handhabbaren Ansatz, um den Differenzierungszustand, chromatinabhängige Genregulation und die Aufrechterhaltung der Zellidentität zu untersuchen.

Neuro D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NEUROD1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Neuro D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NEUROD1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NEUROD1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Neuro D-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NEUROD1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Neuro D-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Neuro D-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NEUROD1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.