Plasmide Double Nickase (m) Nek7: sc-425603-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Nek7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Nek7 Double Nickase (m) et le plasmide Nek7 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Nek7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Nek7 Antibody (B-5): sc-393539
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Nek7 | sc-425603-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Nek7** code la kinase 7 apparentée à NIMA (NIMA-related kinase 7), une kinase sérine/thréonine agissant en aval de NEK9/NEK6 dans le contrôle de la mitose et les processus associés au centrosome. NEK7 contribue à l’organisation des microtubules, à l’assemblage du fuseau mitotique et au bon déroulement de la mitose, ce qui l’associe à la régulation des points de contrôle du cycle cellulaire et à la stabilité du génome. Au-delà de la prolifération, NEK7 a également été impliquée dans la signalisation inflammatoire via la régulation de l’activation de l’inflammasome NLRP3, reliant la dynamique du cytosquelette aux réponses immunitaires innées. Une activité ou une expression dérégulée de NEK7 est donc pertinente pour l’étude, dans des modèles murins, des troubles prolifératifs, de l’instabilité chromosomique et des physiopathologies associées à l’inflammation.
Nek7 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nek7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nek7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nek7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nek7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.