Plásmido Doble Nickase (h) Nek7: sc-405218-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Nek7 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Nek7 (h) y el plásmido de doble nickasa Nek7 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NEK7. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nek7 Anticuerpo (B-5): sc-393539
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Nek7 | sc-405218-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Nek7 | sc-405218-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NEK7 codifica la quinasa de serina/treonina Nek7, una quinasa relacionada con NIMA que regula la función del centrosoma, el ensamblaje del huso mitótico y la progresión a través de la mitosis al coordinar la dinámica de los microtúbulos y los puntos de control del ciclo celular. Nek7 también participa en la señalización sensible al estrés, incluida la regulación de la activación del inflamasoma NLRP3 y de las respuestas inflamatorias posteriores, lo que vincula el control de la división celular con las vías de la inmunidad innata. La actividad o expresión desregulada de NEK7 se ha asociado con proliferación aberrante e inestabilidad genómica, lo que lo hace relevante para estudios de biología tumoral y patologías impulsadas por el ciclo celular. En consecuencia, NEK7 se investiga con frecuencia en modelos de regulación mitótica, remodelación del citoesqueleto y fenotipos celulares asociados a la inflamación.
Nek7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NEK7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NEK7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NEK7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NEK7 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.