Nek7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425603

Übersicht

Nek7 (NIMA-related kinase 7) ist eine Serin/Threonin-Kinase und fungiert als zentraler Regulator des mitotischen Fortschreitens, indem sie die Aktivität des Zentrosoms, den Aufbau der Spindel und die korrekte Chromosomentrennung koordiniert. In proliferierenden Zellen unterstützt die Nek7-Signalgebung Zellzyklusübergänge und die Mikrotubuli-Dynamik und verknüpft damit die Kinasekontrolle mit der Organisation des Zytoskeletts sowie mit Kontrollpunkten, die die genomische Stabilität aufrechterhalten. Nek7 wurde außerdem mit der angeborenen Immunantwort in Verbindung gebracht, insbesondere über die Regulation der Aktivierung des NLRP3-Inflammasoms, wodurch Zellzykluskinasen mit den Effekten entzündlicher Signalwege verknüpft werden. Eine fehlregulierte Nek7-Aktivität oder -Expression ist daher relevant für Studien zu aberranter Proliferation, Chromosomeninstabilität und entzündungsassoziierten Phänotypen in Mausmodellsystemen.

Das Nek7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nek7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nek7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nek7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nek7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nek7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nek7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nek7-Exone abzielen, die für die Nek7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nek7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Nek7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Nek7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nek7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nek7 HDR-Plasmid (m) und Nek7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nek7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nek7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.