Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nek7 (m): sc-425603

Présentation

Nek7 (NIMA-related kinase 7) est une kinase sérine/thréonine qui agit comme un régulateur clé de la progression mitotique, en coordonnant l’activité du centrosome, l’assemblage du fuseau et la ségrégation fidèle des chromosomes. Dans les cellules en prolifération, la signalisation de Nek7 soutient les transitions du cycle cellulaire et la dynamique des microtubules, reliant le contrôle exercé par les kinases à l’organisation du cytosquelette et aux points de contrôle qui maintiennent la stabilité génomique. Nek7 a également été impliquée dans la signalisation de l’immunité innée via la régulation de l’activation de l’inflammasome NLRP3, établissant un lien entre les kinases du cycle cellulaire et les sorties des voies inflammatoires. Une activité ou une expression dérégulée de Nek7 est donc pertinente pour l’étude d’une prolifération aberrante, de l’instabilité chromosomique et de phénotypes associés à l’inflammation dans des systèmes de modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nek7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nek7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nek7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nek7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nek7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nek7 pour l'étude de la signalisation de Nek7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nek7 essentiels à la fonction de Nek7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nek7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nek7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nek7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nek7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nek7 plasmide HDR (m) et le Nek7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nek7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nek7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.